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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟

更新時(shí)間:2023-02-27      瀏覽次數(shù):1015

每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對(duì)應(yīng)的說明書,而每一份說明書里都會(huì)有寫樣本和稀釋液的稀釋比例,為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中,將為您分析:為何ELISA實(shí)驗(yàn)血清樣本都需要稀釋?

在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為什么要稀釋?有兩個(gè)原因:
1)競(jìng)爭(zhēng)抑制比較明顯,應(yīng)稀釋競(jìng)爭(zhēng)物;
2)以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。血清稀釋用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有效降低ELISA本底,當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競(jìng)爭(zhēng)還是間接競(jìng)爭(zhēng),血清的稀釋倍數(shù)肯定要事先確定,但也不用一點(diǎn)點(diǎn),你做一個(gè)預(yù)試驗(yàn)即可,選擇OD在1.0左右的稀釋倍數(shù),即你的競(jìng)爭(zhēng)ELISA中陰性孔OD在1.0,這樣作出來的曲線比較敏感。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟:
先把蛋白稀釋一定的倍數(shù),比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個(gè)參數(shù)),將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板,再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌,再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng),經(jīng)孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應(yīng)后分別測(cè)定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為zui適包被濃度。

一般總是要選擇那個(gè)O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。

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